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浙江快乐12高效液相色谱技术在食品分析中的作用

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浏览:次 2017-06-07 10:10:24

高效液相色谱技术在食品分析中的作用高效液相色谱技术在食品分析中的作用高效液相色谱技术在食品分析中的作用杭州旭昱科技有限浙江快乐121.前言当代分析仪器发展的方向是高速,高灵敏度,高精确度,自动化和省力。在色谱法领域中,210世纪60年代后半期,气相色谱法理论的利用使柱色谱法得到了显著发展,而柱色谱中开发的技术和方法又被薄层色谱法和液相色谱法所采有,从而使色谱法的功能大大提高,利用领域日趋扩大。为了把这些现代色谱法和过去的方法相区分,把它们称为高效色谱法。高效色谱法的建立,使色谱法在分析化学中的地位得到了提高。如今,色谱法在分析组成复杂的物资和多组分混合物时,是极其重要的分析方法。利用色谱法的目的是进行定量分析和单个分离出纯物资。实际上,可根据分析目的,采取气相色谱法、液相色谱法和薄层谱法中的1种或相互联用之。液相色谱法和薄层色谱法中,所有可溶于活动相的物资都可作为分析对象。由于液相色谱

高效液相色谱技术汽车传动轴扭转疲劳试验机在食品分析中的作用

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1.前言
当代分析仪器发展的方向是高速,高灵敏度,高精确度,自动化和省力。在色谱法领域中,210世纪60年代后半期,气相色谱法理论的利用使柱色谱法得到了显著发展,而柱色谱中开发的技术和方法又被薄层色谱法和液相色谱法所采有,从而使色谱法的功能大大提高,利用领域日趋扩大。为了把这些现代色谱法和过去的方法相区分,把它们称为高效色谱法。高效色谱法的建立,使色谱法在分析化学中的地位得到了提高。如今,色谱法在分析组成复杂的物资和多组分混合物时,是极其重要的分析方法。利用色谱法的目的是进行定量分析和单个分离出纯物资。实际上,可根据分析目的,采取气相色谱法、液相色谱法和薄层谱法中的1种或相互联用之。液相色谱法和薄层色谱法中,所有可溶于活动相的物资都360转轴扭力试验机可作为分析对象。由于液相色谱在高效、简便、快速方面倍受分析工浙江快乐12推重。使用较为广泛,而薄层色谱则因分析时间较长,定量精确度觉差而作为高效液相色普预实验方法[1]。
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代布料拉力试验机发展起来的1种新型分析、分离技术。它是在经典液相色谱法的基础上,引入气相色谱法的理论和技术,以高压输送活动相,采取高效固定相及高灵敏度检测器发展而成的现代液相色谱分析方法。现代HPLC采取了小口径柱(约1~3mm)和极细小的高效色谱填料(粒径 <5μm),用高压输液泵使溶剂以高流速(1~10cm/s)通过色谱柱,分离速度比经典柱色谱法快100~1000倍,分离效力已接近毛细管柱气相色谱法。因此, HPLC具有高压、高速、高效、高灵敏度4大特点。HPLC与GC比较,虽然需要解决延长使用寿命的问题,但专家们普遍认为在众多分析领域中HPLC比GC 更加汽车驱动桥总成静态扭转试验机实用。HPLC能够分析遭到热稳定性和挥发性限制的化合物,而用GC分析这些化合物时则必须借助其衍生物。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用、流橡胶试验机出组分易搜集等优点,所以被广泛利用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等领域[2]。
2.HPLC在糖类分析中的利用
糖是由碳、氢、氧3种元素组成的有机化合物,亦称碳水化合物,根据其份子结构分为单糖、双糖、低聚糖和多糖。食品分析工浙江快乐12对糖分析方法的要求是既要适用于简单食品,又要适用于复杂加工的食品,而且测定要准确、迅速、可靠。HPLC法测定糖具有明显的优势,并得到了广泛的利用。糖的HPLC测定法主要有两类。1类采取阳离子交换剂或凝胶柱,以水、醋酸钙溶液或稀酸等作为活动相。第2类是使用化学键合固定相,活动简易卧式拉力试验机相为乙腈-水。
2.1 低份子糖的分析
低份子糖的分析,是指单糖到4糖的分析,食品分析专家要求能准确地测定部份或全部果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖。果糖、葡萄糖、蔗糖的分析可以提供蔗糖转化的程度及转化糖在产品中的含量;乳糖常作为脱脂奶粉等乳制品的1个主要指标;蔗糖则是最多见的食品成份,这些都是HPLC分析食品中低份子糖的典型例子。用氨基键合相硅胶柱进行低份子糖的分析时,其典型的色谱条件是:柱长15~25cm,活动相为乙腈溶液(乙腈20~80%),检测用示差折光检测器(RID),进样量通常为10~100μL,分析时间1般在20min之内[3]。
2.2 低聚糖的分析
低聚糖的分析与上述低份子糖的分析极其类似,一样可用氨基健合柱,但是活动相中水的比例要增加到40~60%,分析时间较长,大约需要30min。近来国内已有很多文献报道。陈洪用HPLC法测定了饴糖中的低聚糖,发现饴糖中的低聚糖以麦芽糖为主,含量为25~39%,另外还含少许的葡萄糖、麦芽3糖和麦芽4糖,葡萄糖、麦芽糖和麦芽3糖的最低检出限在微克级。还有文献报道了用高效液相色谱法分析蔗果低聚糖合成液和测定异麦芽低聚糖的组分[3]。
2.3 多糖分析
多糖的分析,主要是用于分离纯化及纯度和份子量的测定。过去经常使用的测定方法有超速离心法、高压电泳法、渗透压法、粘度法和光散射法等。使用这些方法,操作麻烦,结果误差很大。710年代以后,由于耐高压合成凝胶的出现,HPLC已可用于多糖纯度和份子量的测定和制备多糖的分离,这样效果更好。
3.HPLC在氨基酸分析中的利用
测定氨基酸的标准方法是利用与茚3酮的显色反应和离子交换色谱法分离。但是,Baky-er,E.于1976年用HPLC法分析氨基酸是利用衍生反应,使之转化成具有强荧光衍生物检测的浓度要比茚3酮反应低4-5个数量级。所以该法要比气相色谱法要灵敏。HPLC法的操作条件是采取双柱系统,柱1用梯度洗脱,柱2用恒定洗脱。荧光检测DNS-氨基酸的激起波长为340nm,发射波长为510nm。可用正相色谱分离,在1毫升/分钟流速下,柱温65℃时可得到18种氨基酸的分离图谱。也可用反相色谱分离,在1.5毫升/分钟流速下,柱温45℃可得到17种氨基酸的分离图谱。检测灵敏度和操作时间比标准方法都有很大提高。
在该方法研究的基础上,有人前后把它用于分析食粮中的赖氨酸、蛋氨酸和色氨酸。J.J.Warthesen和P.L.Lramer1987年报导用HPLC法测定强化小麦粉中游离的赖氨酸。他们先从强化的面粉或面包中提取游离赖氨酸,用3氯醋酸沉淀蛋白质,离心后取上清液用0.1M硼酸缓冲液调PH至9.0,最后定容到1定量。接着进行丹酰反应,让彩金机试验机赖氨酸提取液与氯化丹酰丙酮液于40℃避光条件下反应生成2丹酰赖氨酸衍生物。2丹酰赖氨酸衍生物通过108烷基键合相柱,以乙腈/0.01MNa2HPO4(2:5)为活动相,在1.5毫升/分钟流速下于8分钟后分离出来,用紫外检测器254nm外测。W.R.Peterson等人以大豆、酪蛋白、面筋、玉米为例,提出用HPLC法测定食品蛋白质中总赖氨酸和有效赖氨酸的分析方法。关于赖氨酸的测定方法与前者基本相同,只是增加1个用6.0NHCL水解的步骤,并把1.0毫克份子氯化丹酰丙酮液浓度提高到150毫克份子。在有效赖氨酸(具有游离ε-氨基的赖氨酸,若ε-氨基产生变化,会使赖氨酸失去营养强性)的测定中,又用HPLC法与氟代2硝基苯分光光度法进行了比较,其分析结果没明显差异。而且HPLC还比后者少了1个样品净化进程。色谱分离ε-2硝基苯赖氨基仍用108烷基键同相柱,乙腈/0.01M醋酸缓冲液(20:80)(PH4.0)为活动相,于紫外可见光检测器436nm处测定[4]。
分析强化食品中游离蛋氨酸的HPLC法是Okeefe.L.L.和Warthesen.J.J.提出的,用1.0%甲醇从强化食品中提取DL-蛋氨酸,再用3氯醋酸沉淀蛋白质,经过滤用5NNAOH把滤液PH调至9.5,用水定容后取部份提取液进行丹酰反应。蛋氨酸的丹酰衍生物与其氯化物通过108烷微动磨损试验机基键合相柱,乙腈/0.01MNa2HPO4(1:4 ,PH7.9)作活动相,在2毫升/分钟流速下得到分离,于紫外检测器254mn处测定。
用HPLC法测定食品中的色氨酸是利用份子本身的荧光,直接打包带拉力试验机通过荧光计检测,激起波长为283nm,发射波为343nm。用多孔硅胶柱分离,PH3.8的醋酸缓冲液作活动相,在2.5毫升/分钟流速下取得大麦水解物的色氨酸分离图谱。检测范围是橡胶低温脆性试验机8×10⑼―270×10⑼克。在这项研究中,用扭簧扭转试验机含有麦芽糊精的6MNAOH水解蛋白质。麦芽糊精作塑料落锤冲击试验机抗氧剂,可提高某些酶(溶菌酶,胰凝乳朊酶)中色氨酸的回收,但对菜子粉中色氨酸的回收没影响。同时还证明蛋白质水解时间对色氨酸回收的影响。
4.HPLC在脂肪酸分析中的利用
谷物与饲料中的脂肪酸提取物可以它们的P-溴代苯酰甲酯汽车零部件扭转试验机衍生物情势用HPLC法分离测定。在溶于A/甲醇(2:1)液的类脂提取物中加入0.05N的氢氧化钾/甲醇溶液,使碱与酸的克份子比例最少在9:1,再通过旋转蒸发器浓缩样品。皂化产物没必要离析出来,类脂提取物在催化剂和苯酰甲基溴化物作用下,70-80℃、30分钟以内可完成衍生反应。脂肪酸的P-溴代苯酰甲酯衍生物在10手机硬压试验机8烷基键合相柱上分离,甲醇/水(90:10)为活动相,以1毫升/分钟流速,室温条件下用紫外检测器分析。该法说明利用衍生反应分析谷物和饲料中的游离脂肪酸或从甘油3酸脂衍生而来的脂肪酸都是有效的。但在等压溶剂系统中不能把106烷酸与油酸的衍生物分离开来,这也是与气相色谱法相比较的不同的地方。不过后来有人提出用梯度洗脱可以把上两种脂肪酸分离开[4]。
HPLC法还可落锤冲击试验机以用示差折光检测器分离硬质小麦及软质小麦中含量不同的固醇软脂酸盐和固醇亚油酸盐,在多孔硅胶柱上分离,己烷/氯纺(9:1)作活动相。
5.HPLC在维生素分析中的利用
维生素C是1种对人体10分重要但人体本身又不能合成的1类重要化合物。由于它具有抗坏血酸的生理功能,又名抗坏血酸,若严重缺少会引发坏血病。维生素C还可参与体内氧化还原反应,具有解毒的作用。30 年代时,维生素C就被广泛用于增加机体对沾染病的抵抗力,最近几年的研究表明维生素C可预防癌症,并对肝炎、肝硬变有疗效。它可增进胶原蛋白抗体的构成,因胶原蛋白能包围癌细胞,维生素C具有抗癌作用,因它能参与神经介质、激素的生物合运输包装水平冲击试验机成,同时具有预防感冒、增强机体免疫力等功能[5]。人体本身不能合成维生素C,必须从食品摄取。维生素C广泛存在于新鲜水果和蔬菜中,测定方法1般有比色法、荧光分光光度法、化学滴定法等。由于上述方法操作烦琐,最近几年来多采取高效液相色谱法测定[6]。梯姆肯试验机
对维生素的分析,除个办公椅反复靠背试验机别几种维生素(维生素B6、B12和维生素H等)必须采取微生物法进行测定外,大多数维生素都可采取液相色谱法进行分析。水溶性维生素(B1、B2、C)的测定,将样品用酸消化后,用酶分解蛋白质,然后用溶剂提取出维生素,而脂溶性维生素(A、K、E)的测定则将食品进行皂化处理后,提取不皂化物,然后再从不皂化物中将维生素萃取出来,预处理后的两类维生素,通过液相色谱-紫外/可见检测器在各自所固有的波长条件下进行定量测定。高效液相色谱法根据不同的要求,所选择的固定相、活动相、流速、检测器和检测波长都不相同。多数方法采取荧光检测器、电化学检测器、紫外检测器或在检测中变换检测波长。李学梅测定保健食品中维生素C时,选用的色谱条件为EclipseXDB-C18 416mm×250mm 5μm柱、C18416mm&tim玻璃弯曲强度试验机es;20mm 5μm预柱,活动相为甲醇:0102mol/L[2]。
6.HPLC在其他物资分析中的利用
6.1 HPLC在酸奶研究中的利用
随着现代分析手段的不断更新,愈来愈多高灵敏度、高准确度的先进分析技术和方法被用于酸奶的分析检验。由于高效液相色谱(HPLC)具有快速、方便、分辨率高、分离效果好、重现性好等优点,可将其用于检测酸奶中富含的糖、脂、氨基酸、维生素等营养物资。原理是样品先经预处理后,进行液相色谱分析,HP柱用粒径为5~10μm的全多孔微粒担钢管拉伸试验机体作载体,将洗脱剂(活动相)以高压泵注入柱内,构成显著的压力降,样品组分迅速连续不断的在两相间进行反复屡次平衡分配,以到达分离的目鞋材拉力试验机的,各组分流出顺序依其组分对两相间的相对亲和性。分离后的组分通过鉴定器产生讯号,经放大后在记录仪上绘出色谱峰[7]。
6.2 HPLC法测定红葡萄酒中的白藜芦醇
高效液相色谱法测定红葡萄酒中白藜芦醇及其甙的顺、反异构体,操作简单,精密度高,重复性好,可用于葡萄酒中白藜芦醇4种异构体的测定。尽人皆知,适当饮用红葡萄酒对健康极其有益白藜芦醇(resv纸箱抗压强度试验机eratrol,简称RV)是红葡萄酒中发挥保护作用的主要功能因子。白藜芦醇的化学名为3,4’,5-3羟基2乙烯,在自然状态下,其3位羟基上的氢原子被1个葡萄糖份子取代构成了白藜芦醇甙(piceid,简称PD)。已有报导证实白藜芦醇具有抗炎、抗菌、抗氧化、调理脂代谢、抗凝血、调理雌激素作用及抗肿瘤等多种生物活性,因此葡萄酒(汁)中白藜芦醇含量的高低自然成为影响其保健功效的因素之1。
  采取高效液相色谱法(HPLC)测定白藜芦醇含量已有1些报导[。用高效液相色谱法测定水解前后顺、反式白藜芦醇含量的变化,从而计算出葡萄酒中白藜芦醇的4种异构体的含量。色谱柱为SymmetryC18柱(319 mm i.d.×150 mm),活动相为乙醇-0.05%乙酸水溶液(体积比为23∶77),紫外检测波长为306nm。其特点在于:采取阳光照耀将白藜芦醇及其甙的反式异构体部份转化成顺式异构体;利用β⑵葡萄糖苷酶将顺式及反式白藜芦醇甙中的β⑵葡萄糖苷键水解成为相应的白藜芦醇异构体,从而解决了因葡萄酒中白藜芦醇甙峰与其他组分峰堆叠而不能被直接测定的问题;通过测定酶水解前后葡萄酒(汁)中顺式、反式白藜芦醇含量的变化,计算出葡萄酒(汁)中白藜芦醇及其甙的顺、反异构体的含量[8]。
6.3 HPLC法分析罗汉果中主要皂甙成份的研究
罗汉果葫芦科罗气动插头插座插拔试验机汉果属多年生草质藤本植物的成熟果实,是我国传统的药用植物,临床上可用于医治高血压、肺结核、哮喘、胃炎、百日咳、急慢性气管炎和急慢性扁桃腺炎等疾病。罗汉果的主要活性成份是葫芦素烷3萜类皂甙,关于罗汉果皂甙的分析,目前普遍利用的是香草醛-硫酸比色法和香草醛-高氯酸比色法测定总皂甙含量[9],但分光光度法的稳定性及专属性差。H.C.Makapugay等建立的高效液相分析方法,仅能分析罗汉果甙V,不能分离分析其他皂甙组。张云竹等[10]建立1种快速高效的高压液相分析方法,对罗汉果中的主要皂uv耐光试验机甙成份进行测定。以C18柱为色谱柱,采取反相高效液相法分离分析罗汉果皂甙。结果建立了罗汉果皂甙的HPLC分析条件,其色谱条件为:活动相23%的乙腈水溶液;流速1ml/min;检测波长210nm;柱温为室温;灵敏度0.04AUFS。采取上述的液相分析方法分析4种罗汉果皂甙的含量,发现该方法简便、快速、准确、线性范围在0.5~13.7指针式戳穿强度试验机5μg之间,且线性关系良好(R≥0.99),加标回收率高(94.46%~105.05%),精密度良好(RSD=1.40%~3.31%)。因此HPLC方法可用于分析罗汉果及其制品中的罗汉果皂甙含量。
6.4 HPLC法对N-亚硝胺的测定
N-亚硝胺可引发肝癌、结肠癌等。某些 N-亚硝胺化合物,如 N-亚硝基2甲胺、N-亚硝基2乙胺、N-亚硝基4氢吡咯等也是1类致癌物资。过去采取气相色谱法测定食品中挥发性亚硝胺,其中仅色谱测定1步便需耗时1h之多,而采取高效液相色谱法则只需要13min。
6.5 HPLC法对芳香胺的测定
芳香胺在合成色素中应较多。当食品中色素添加过量时,对人体可造成害微控电子万能试验机。因此芳香胺的分离测定在食品安全上也很重要。各种2胺异构体的分离测定可采取PermaphaseETH谱柱,移动相同甲醇-环戊烷(5∶95)。2,6-甲苯胺、2,3-2甲苯胺及苯胺的分离可用Durpakcarbowax400/Corasil,淋洗液为异丙醇-已烷(10∶90)。硝基苯胺异构体的分离用Vydac吸附剂,用已烷-A(1∶1)作淋洗液。按邻、对间位顺序冲出,分离时间为3min~18min[11]。
6.6 HPLC法对黄曲霉毒素的测定
黄曲霉毒素是黄曲霉菌类所产生的代谢产物。各种发霉的食品如花生、大米、玉米等,都可能遭此种毒素污染。现已肯定黄曲霉毒素有B1、B2、B2a、G1、G2、G2a、M1、M2等 8种结构的类似物。这些毒素毒性极强,在实验动物身上几个微克便能诱致肝癌的产生。高效液相色谱法分离测500吨卧式拉力试验机定黄曲霉毒素幕墙四性试验机,可采取Sli-X-Ⅱ静液压试验机,室温下A-异辛烷淋洗,B1、B2、G1、G2顺次冲出,分析时间约7min。如PermaphaseETH,2-丙醇-水(3∶97)则以G1、B2、G2、B1次序冲出。由于黄曲霉毒素在254纳米吸收很强,因此可检井盖试验机测出10-9。另外,此毒素还能产生荧光,利用荧光检测器则检出灵敏度可更高。
7.结语
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,活动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因此可以分离热不稳定和非挥发性的离解的和非离解的和各种份子量范围的物资。与试样预处理技术相配合,HPLC所到达手机振动耐磨试验机的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上10分相近的物资成为可能,能够分离复杂火花试验机相体中的微量成份。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物资活性的条件下完成其分离。由于高压输液泵的使用,相对经典液相色谱,其分析时间大大缩短,当输液压力增加时,活动相流速会加快,完成1个样品的分析时间仅需几分钟到几10分钟。因此,高效液相色谱技术在食品分析领域具有巨大的现实意义。